Obbiettivi C-Apochromat 10x/0,45 W, 40x/1,2 W Korr e 63x/1,2 W Korr a immersione in acqua per le massime esigenze: Se si desidera esaminare un preparato biologico il cui indice di rifrazione si avvicina a n = 1,33 (acqua) con un obbiettivo ad apertura elevata, un obbiettivo ad immersione in olio può offrire un risultato utile solo se non si mette a fuoco troppo a fondo nel preparato. Se si desidera esaminare il preparato a livelli più profondi, le forti aberrazioni sferiche annulleranno contrasto e risoluzione. Allo stesso modo, verrà ridotta drasticamente la luminosità; ciò si noterà soprattutto nelle applicazioni di microscopia confocale, con un elevato peggioramento del rapporto segnale-rumore. Per questo motivo, un obbiettivo ad immersione in olio, per quanto di elevata qualità, non rappresenta una soluzione ottimale per un preparato simile all´acqua. Nella progettazione degli obbiettivi, l´indice di rifrazione del preparato (e del mezzo di immersione) gioca un ruolo essenziale. Nel calcolo di correzione di un obbiettivo ad immersione in olio o si parte dal presupposto che l´indice di rifrazione del mezzo d´immersione e di inclusione sono identici (n = 1,52). Per gli obbiettivi ad immersione in acqua, nel conteggio viene presupposto un indice di rifrazione di n = 1,33 per il mezzo di immersione e di inclusione. Particolarità della gamma obbiettivi: C-Apochromat 40x e 63x corretti da UV a IR!
Altri obiettivi ad immersione in acqua:
Per l´impiego senza vetrino coprioggetto:
- Gli obiettivi Achroplan W, che sono corretti per l´impiego senza vetrino coprioggetto e distanze di lavoro elevate, in particolare per i microscopi diritti per la microiniezione e patch-clamp.
- Obiettivo Plan-Apochromat W 63x/1.0, corretto da VIS a IR.
Per l´impiego con vetrino coprioggetto:
- Obiettivi per multimmersione LCI Plan-Neofluar, adatti per i mezzi di immersione con indici di rifrazione tra acqua e olio e corretti per uno spessore vetrino coprioggetto.
Se un preparato acquoso viene esaminato al microscopio con esigenze elevate, per esempio con un microscopio a scansione laser, devono essere soddisfatti una serie di requisiti speciali:
- Apertura elevata per una risoluzione elevata in caso di sezioni ottiche fini ed elevata intensità di fluorescenza
- Distanza di lavoro più lunga per esami 3D
- Limitata aberrazione cromatica in lunghezza, in modo che i piani di messa a fuoco di diversi colori coincidano
- Limitata differenza cromatica d´ingrandimento, in modo da rappresentare diverse fluorescenze con una copertura uniforme
- Campo di vista piano, per consentire una ricostruzione 3D fedele alla realtà
Per soddisfare questi requisiti, il modello C-Apochromat 40x/1,2W Korr è stato sviluppato con le seguenti proprietà:
- Ad immersione in acqua per campioni acquosi (sezioni vitali, cellule di coltura, preparati con mezzo di inclusione acquoso)
- Anello di correzione per correggere le differenze di spessore del vetrino coprioggetto (0,14...0,18 mm) e per correggere diverse temperature (scale per 24ºC e 37ºC)
- L´anello di correzione può essere utilizzato anche per l´adeguamento a scostamenti ridotti del preparato dall´indice di rifrazione dell´acqua
- Ingrandimento 40x
- Apertura numerica 1,2
- Distanza di lavoro libera 220 micrometri
- Appiattimento immagine 25 mm (convenzionale) e 12 mm (confocale)
- Trasmissione (assoluta): 50 % a 350 nm, 85 % a 400 nm, 90 % a 500...700 nm
- Elevata correzione cromatica (in base agli obiettivi Plan-Apochromat)
- Nessuna aberrazione sferica nei campioni acquosi
Premessa
Se gli indici di rifrazione del mezzo di inclusione e di immersione non concordano, il percorso ottico avrà diverse lunghezze. A seconda che si metta a fuoco solo a livello superficiale o più in profondità nel preparato, la differenza è trascurabile o significativa. Ciò comporta aberrazioni sferiche sostanziali che conducono a perdite notevoli in termini di nitidezza, contrasto, intensità luminosa e risoluzione in profondità. Inoltre, durante le misurazioni in direzione assiale, la scala non viene restituita in modo corretto. Ciò comporta distorsioni o allungamenti lungo l´asse Z. Per porre fine alla deformazione Z, è necessario che gli indici di rifrazione concordino. Una successiva correzione tramite calcolo rappresenta solo una soluzione d´emergenza poiché le aberrazioni sferiche non possono venire corrette. Per questo motivo, l´immersione deve essere adeguata al preparato. Gli obiettivi con aperture così elevate (per l´acqua il valore 1,2 rappresenta il limite superiore) sono tuttavia molto sensibili per quanto riguarda i diversi spessori dei vetrini coprioggetto. Per questo motivo, l´obiettivo è equipaggiato con un anello di correzione, con il quale è possibile adeguare vetrini coprioggetto di spessore compreso tra 0,14 mm e 0,18 mm. Per garantire le massime prestazioni ottiche è però opportuno, utilizzare vetrini coprioggetto con tolleranze strette (p. es. 0.16...0.17). In caso di utilizzo su di un microscopio a scansione laser è possibile misurare in modo semplice lo spessore del vetrino coprioggetto e quindi, impostare la correzione in modo molto preciso.