Objetivos C-Apochromat 10x/0,45 W, 40x/1,2 W Korr y objetivos para inmersión en agua 63x/1,2 W Korr para máximas exigencias: Al querer estudiar una muestra biológica cuyo índice de refracción es próximo a n = 1,33 (agua) con un objetivo de alta apertura, un objetivo de aceite solamente puede proporcionar un resultado satisfactorio al no enfocar demasiado bajo de la superficie de la muestra. Al querer mirar más profundamente en la muestra, las fuertes aberraciones esféricas aniquilarán el contraste y la resolución. Al igual se reduce drásticamente la luminosidad, lo que se hará notar sobre todo en la microscopía confocal por una fuerte alteración del rango de señal a ruido. Por ello, un objetivo de aceite, por bueno que sea, no es optimo para una muestra con propiedades parecidas al agua. En el momento de calcular los objetivos, el índice de refracción de la muestra (y del medio de inmersión) juega un papel decisivo. Al realizar el cálculo de corrección de un objetivo de aceite partimos del supuesto de que los índices de refracción del medio de inmersión y del medio de embebimiento son iguales (n = 1,52). En el caso de objetivos para agua suponemos en el cálculo un índice de refracción de n = 1,33 como medio de inmersión y de embebimiento. Características especiales de la gama de objetivos: C-Apochromat 40x y 63x corregidos desde UV hasta IR.
Otros objetivos para inmersión en agua:
Para el empleo sin cubreobjetos:
- Objetivos Achroplan W, corregidos para el uso sin cubreobjetos y grandes distancias de trabajo, sobre todo en microscopio verticales para microinyección y patch-clamp.
- Objetivo Plan-Apochromat W 63x/1.0, corregido desde VIS hasta IR.
Para el uso con cubreobjetos:
- Objetivos de inmersión múltiple LCI Plan-Neofluar, apropiados para los medios de inmersión con índices de refracción entre agua y aceite, corregidos para un espesor de cubreobjetos.
Si se debe microscopiar una muestra acuosa bajo altas exigencias, por ejemplo con un microscopio de scanning por láser, hay que cumplir con una serie de requisitos especiales.
- Alta apertura para alta resolución en caso de secciones ópticas delgadas y alta luminosidad de fluorescencia
- Gran distancia de trabajo para exámenes 3D
- Aberración longitudinal baja para que se cubran los planos de enfoque de diferentes colores.
- Diferencia cromática de aumento baja para que se las diferentes fluorescencias se reproduzcan de forma congruente.
- Campo visual plano para que una reconstrucción 3D correspondiente a la realidad sea posible.
Para cumplir con estos requisitos, el C-Apochromat 40x/1,2W Korr fue desarrollado con las siguientes propiedades:
- Inmersión en agua para muestras acuosas (cortes vitales, cultivos de células, muestras dispuestas en un medio acuoso)
- Anillo para la corrección de espesores de cubreobjetos (0,14...0,18 mm) y para la corrección de diferentes temperaturas (escalas para 24ºC y 37ºC)
- El anillo de corrección también es utilizable para la adaptación a pequeñas desviaciones de la muestra al índice de refracción del agua.
- Aumento 40x
- Apertura numérica 1,2
- Distancia de trabajo libre 220 micrómetros
- Aplanamiento del campo de imagen 25 mm (convencional ) o 12 mm (confocal)
- Transmisión (absoluta): 50 % con 350 nm, 85 % con 400 nm, 90 % con 500...700 nm
- Alta corrección cromática (análogamente a los objetivos Plan-Apochromat)
- Ninguna aberración esférica en muestras acuosas
Trasfondo
Si los índices de refracción del medio de suspensión y de inmersión no se corresponden, la longitud de las vías ópticas será diferente.
Según la profundidad con que enfoque la muestra, la diferencia es insignificante o importante. Esto tiene por consecuencia aberraciones esféricas que llevan a pérdidas considerables de nitidez, contraste, luminosidad y profundidad de campo. Adicionalmente, en mediciones en sentido axial, la escala no se reproduce correctamente. Esto lleva a tendidos o distorsiones a lo largo del eje Z. Para evitar la deformación de Z, los índices de refracción tienen que coincidir. Una corrección posterior con ayuda del ordenador solamente es un remedio de emergencia, ya que no es posible corregir las aberraciones esféricas. Por eso la inmersión debe estar adaptada a la muestra. Sin embargo, los objetivos con aperturas tan altas (para agua 1,2 es el límite) son muy delicados en cuanto al espesor diferente de cubreobjetos. Por esto el objetivo tiene un anillo de corrección con el que se podrá ajustar el espesor del cubreobjetos ente 0,14 mm y 0,18 mm de espesor. Por razones del máximo aprovechamiento óptico, sin embargo es recomendable emplear cubreobjetos con tolerancias estrechas (por ejemplo 0.16...0.17). Al emplear el microscopio de scanning por láser, el espesor del cubreobjetos se puede medir fácilmente, por lo que es ajustable con alta precisión.